陕西省道路运输管理条例
陕西省人大常委会
陕西省道路运输管理条例（2006年修正本）
（2000年1月14日陕西省第九届人民代表大会常务委员会第十三次会议通过 根据2003年8月1日陕西省第十届人民代表大会常务委员会第五次会议关于修改《陕西省道路运输管理条例》的决定修正 根据2004年8月3日陕西省第十届人民代表大会常务委员会第十二次会议关于修改《陕西省实施〈中华人民共和国义务教育法〉办法》等30部省地方性法规的决定第二次修正 2006年12月3日陕西省第十届人民代表大会常务委员会第二十八次会议修订 2006年12月3日陕西省人民代表大会常务委员会公告第62号公布 自公布之日起施行）
目录
第一章 总则
第二章 道路运输经营
第一节 客运经营
第二节 货运经营
第三节 其他规定
第三章 道路运输相关业务
第四章 监督检查
第五章 法律责任
第六章 附则
第一章 总则
第一条 为了维护道路运输市场秩序，保障道路运输安全，保护道路运输有关各方当事人的合法权益，促进道路运输事业的发展，根据《中华人民共和国道路运输条例》和有关法律、法规，结合本省实际，制定本条例。
第二条 在本省行政区域内从事道路运输经营及道路运输相关业务活动，应当遵守本条例。
前款所称道路运输经营包括道路旅客运输经营（以下简称客运经营）和道路货物运输经营（以下简称货运经营）；道路运输相关业务包括站（场）经营、机动车维修经营、机动车驾驶员培训经营。
第三条 道路运输经营是指以营利为目的，利用客运机动车和货运机动车为社会公众提供道路运输服务的行为。
公民、法人和其他组织不以道路运输方式营利，仅为本单位和本人服务的道路运输活动，不适用本条例。
第四条 县级以上人民政府交通行政管理部门主管本行政区域内的道路运输管理工作。
县级以上道路运输管理机构负责具体实施道路运输管理工作。
公安、建设、工商、价格、质量技术监督等有关行政管理部门按照各自职责，做好道路运输相关管理工作。
第五条 县级以上交通主管部门应当根据国民经济和社会发展需要，编制道路运输发展规划，并组织实施。
第六条 道路运输管理应当遵循公平、公正、公开和便民的原则，建立公平竞争、规范有序的道路运输市场。
第七条 县级以上人民政府应当积极发展乡村道路运输，为乡村经济和社会发展提供安全、经济、便捷的运输服务。
第二章 道路运输经营
第一节 客运经营
第八条 客运经营者应当依照《中华人民共和国道路运输条例》的规定取得《道路运输经营许可证》并办理工商登记，在许可的经营范围内从事经营活动。
道路运输管理机构应当对客运经营者投入客运经营的车辆配发《道路运输证》，属于客运班车的还应当配发客运标志牌。
客运经营者应当随车携带《道路运输证》。
第九条 同一客运线路有三个以上申请人的，应当通过客运线路服务质量招投标的方式作出许可决定。
第十条 客运班车应当按照批准的营运线路、班次、站点运行，不得擅自变更和脱班。
客运班车应当在规定位置放置客运标志牌，张贴票价表，标明经营单位和监督举报电话。
第十一条 客运班车应当进站经营，不得在站外揽客。
客运班车在城区需要设立停靠点的，由交通主管部门与公安、建设部门协商确定。
第十二条 客运经营者应当遵守道路交通和安全生产的法律、法规及操作规程，保障行车安全。
客运经营者应当文明经营、规范服务、礼貌待客。
第十三条 客运经营者应当确保车辆设备、设施齐全有效，保持车辆清洁、卫生，并采取必要的措施防止在运输过程中发生侵害旅客人身、财产安全的违法行为。
运输过程中发生侵害旅客人身、财产安全的违法行为时，客运机动车驾驶员和乘务员应当组织旅客采取措施制止违法行为，并及时向公安机关报告。
第十四条 因客运经营者过错造成旅客漏乘误乘的，客运经营者应当按照旅客意愿，安排改乘其他车辆或者双倍退还票款。
第十五条 客运经营者不得有下列行为：
（一）以欺骗、强迫、威胁或者兜圈绕行等不正当手段招揽旅客；
（二）无正当理由终止运输、中途更换车辆或者将旅客交他人运送；
（三）伪造、倒卖、转让、涂改《道路运输证》和客运标志牌。
客运经营者因车辆发生故障、事故等原因确需中途更换车辆或者将旅客交他人运送的，不得重复收费；导致运输质量降低的，应当向旅客退还相应的票款差额。
第二节 货运经营
第十六条 货运经营者应当依照《中华人民共和国道路运输条例》的有关规定取得《道路运输经营许可证》并办理工商登记，在许可的经营范围内从事经营活动。
道路运输管理机构应当对货运经营者投入货运经营的车辆配发《道路运输证》。
货运经营者应当随车携带《道路运输证》。
第十七条 货运经营者承运货物时，应当与货物托运人按照《中华人民共和国合同法》的规定订立货物运输合同。
货运经营者承运法律、法规规定限运、凭证运输的货物时，应当查验并确认有关手续齐全有效后方可运输。货运经营者不得承运法律、法规禁止运输的货物。
第十八条 在外省注册的货运经营者需要从事起迄地都在本省境内的货运经营活动一个月以上的，应当到驻地县级以上道路运输管理机构备案。
第十九条 运输危险货物的专用车辆，应当设置危险货物运输标志，配备必要的应急处理器材及防护用品。
从事危险货物运输的驾驶人员、装卸管理人员、押运人员，应当经设区的市人民政府交通主管部门考试合格，取得上岗资格证。
第三节 其他规定
第二十条 客运经营者和货运经营者应当按照国家规定对投入运营的车辆进行二级维护、车辆技术等级评定和综合性能检测。
第二十一条 客运经营者运输旅客时，客运机动车不得超过核定的人数载客，不得违反规定载货。
货运经营者运输货物时，货运机动车应当符合核定的载质量载货，严禁超载；载物的长、宽、高不得违反装载要求。
禁止货运机动车载客。
第二十二条 汽车租赁经营者不得以提供驾驶服务等方式从事或者变相从事道路运输经营。
第三章 道路运输相关业务
第二十三条 道路运输相关业务经营者应当依照《中华人民共和国道路运输条例》的规定取得《道路运输经营许可证》并办理工商登记，在许可的经营范围内从事经营活动。
第二十四条 道路运输站（场）的设置和建设，应当符合道路运输发展规划和国家有关标准。
第二十五条 道路旅客运输站（场）经营者应当按照国家规定配备安全检查设施，对乘客携带的物品进行安全检查。乘客应当接受对携带物品的安全检查。
第二十六条 道路货物运输站（场）经营者应当按照货物的性质和保管要求，对货物进行分类存放，保证货物完好无损。
第二十七条 道路货物运输站（场）经营者应当按照规定的业务操作规程进行货物的搬运装卸；货物搬运装卸有特殊要求的，应当按照要求作业。
第二十八条 道路货物运输代理经营者应当将受理的货物运输业务交由具有经营资格的货运经营者承运。
第二十九条 机动车维修经营者应当按照道路运输管理机构许可的维修车型种类、服务能力和经营项目挂牌经营，不得超出许可范围承修机动车。
第三十条 消费者有权自主选择机动车维修经营者。任何行政管理部门不得强制或者变相强制消费者到指定的机动车维修经营者维修机动车。
第三十一条 机动车维修经营者应当按照国家、行业或者地方的维修标准和规范进行维修，不得使用假冒伪劣配件维修机动车。
第三十二条 机动车维修经营者承接机动车二级维护、总成修理、整车修理的，应当与托修方签订书面维修合同，并僵立维修档案，做好维修记录。
第三十三条 承担机动车维修竣工质量检验的机动车维修经营者或者机动车综合性能检测机构应当按照检测技术标准，对机动车进行检测，如实提供检测结果证明，并对检测结果承担法律责任。
第三十四条 机动车驾驶员培训机构应当按照国务院交通主管部门规定的教学大纲进行培训，确保培训质量。对未经培训和培训考核不合格的人员，不得发给培训结业证。
第四章 监督检查
第三十五条 道路运输管理机构应当严格按照职责权限和程序对道路运输经营活动进行监督检查，维护道路运输经营秩序，保障运输生产安全。
道路运输管理机构应当重点在道路运输以及相关业务经营场所、客货集散地进行监督检查。
道路运输管理机构经省人民政府批准在公路路口进行检查时，不得影响交通秩序，不得随意拦截正常行驶的道路运输车辆。
第三十六条 道路运输管理机构的工作人员对道路运输经营活动进行监督检查时，应当有二名以上人员参加，并佩戴执法标志，向当事人出示行政执法证。
用于道路运输监督检查的专用车辆，应当设置统一的车身标志。
第三十七条 道路运输经营者应当接受道路运输管理机构及其工作人员依法实施的监督检查，如实提供情况，不得阻碍道路运输管理机构工作人员执行公务。
第三十八条 道路运输管理机构的工作人员在实施道路运输监督检查过程中，发现车辆超载行为的，应当立即予以制止，并采取相应措施安排旅客改乘或者强制卸货。
第三十九条 道路运输管理机构的工作人员在实施道路运输监督检查过程中，对没有《道路运输证》又无法当场提供其他有效证明的车辆予以暂扣的，应当妥善保管，不得使用，不得收取或者变相收取保管费用。
第四十条 道路运输管理机构暂扣当事人车辆的，应当出具暂扣证并告知当事人在二十日内到指定地点接受处理。当事人接受处理后，道路运输管理机构应当于当日内退还暂扣的车辆。
道路运输管理机构暂扣车辆时，应当帮助当事人联系车辆，将乘客或者货物及时转运。
当事人未在二十日内到指定地点接受处理的，道路运输管理机构可以依法作出行政处罚决定，将行政处罚决定书送达当事人。当事人对行政处罚决定逾期不申请复议，也不起诉，又不履行的，道路运输管理机构可以申请人民法院强制执行。
第四十一条 道路运输经营者以及道路运输相关业务经营者应当按照国家和省的规定缴纳道路运输管理费。
第四十二条 对违反本条例的行为，公民、法人和其他组织有权向交通主管部门或者道路运输管理机构举报和投诉。交通主管部门或者道路运输管理机构接到举报和投诉后，应当及时查处并在十五日内作出答复。
第五章 法律责任
第四十三条 违反本条例第十条第二款规定，客运班车未在规定位置放置客运标志牌，标明经营单位和监督举报电话的，由县级以上道路运输管理机构责令改正，处以警告或者二十元以上二百元以下的罚款。
第四十四条 违反本条例第十五条规定，由县级以上道路运输管理机构责令改正，处一千元以上三千元以下的罚款；情节严重的，由原许可机关吊销《道路运输经营许可证》。
当事人行为违反《中华人民共和国治安管理处罚法》的，由公安机关依法处理。
第四十五条 违反本条例第二十二条规定，汽车租赁经营者以提供驾驶服务等方式从事或者变相从事道路运输经营的，由县级以上道路运输管理机构责令停业；有违法所得的，没收违法所得，处违法所得二倍以上十倍以下的罚款；没有违法所得或者违法所得不足二万元的，处三万元以上十万元以下的罚款；构成犯罪的，由司法机关依法追究刑事责任。
第四十六条 违反本条例第二十五条规定，道路旅客运输站（场）经营者不按规定进行安全检查的，由县级以上道路运输管理机构责令限期改正，逾期不改正的，处五百元以上三千元以下罚款；情节严重的，责令停业一至三个月。
第四十七条 违反本条例第二十八条规定，道路货物运输代理经营者将其受理的货物运输业务交由无经营资格的承运人承运的，由县级以上道路运输管理机构没收违法所得，可以并处五百元以上三千元以下的罚款。
第四十八条 违反本条例第二十九条规定，机动车维修经营者超出许可范围承修车辆的，由县级以上道路运输管理机构责令停业；有违法所得的，没收违法所得，处违法所得二倍以上十倍以下的罚款；没有违法所得或者违法所得不足一万元的，处二万元以上五万元以下的罚款。
第四十九条 县级以上道路运输管理机构对违反《中华人民共和国道路运输条例》和本条例规定的行为，作出责令停业、吊销《道路运输经营许可证》、三万元以上罚款处罚决定的，应当告知当事人有要求听证的权利。
第五十条 违反本条例规定的其他行为，法律、法规已有处罚规定的，从其规定。
第五十一条 交通主管部门和道路运输管理机构的工作人员有下列情形之一的，由其所在单位或者上级主管部门依法给予行政处分；构成犯罪的，由司法机关依法追究刑事责任：
（一）不依照法定条件、程序和期限实施行政许可的；
（二）参与或者变相参与道路运输经营以及道路运输相关业务的；
（三）发现违法行为不及时查处的；
（四）违反规定拦截、检查正常行驶的道路运输车辆的；
（五）违法扣留运输车辆、《道路运输证》的；
（六）索取、收受他人财物，或者谋取其他利益的；
（七）其他违法行为。
第六章 附则
第五十二条 出租车客运和城市公共汽车客运管理依照《陕西省出租汽车客运条例》等有关法律、法规的规定执行。
第五十三条 轮式拖拉机的维修以及驾驶员培训等由农业机械主管部门依照有关法律、法规的规定执行。
第五十四条 本条例自公布之日起施行。
关于进境鸵鸟检疫有关问题的通知
动植物检疫局
关于进境鸵鸟检疫有关问题的通知
（动植检动字〔１９９６〕８７号）
各直属口岸动植物检疫局、动物检疫所：
近年来，鸵鸟的引进和繁养在我国呈现了迅猛发展的势头，为满足引进鸵鸟及其种蛋的需要，一年多来，我们先后与美国、加拿大、法国、荷兰、津巴布韦、博茨瓦那、澳大利亚和纳米比亚签署了进境鸵鸟的检疫和卫生条件议定书，从而为引进鸵鸟在检疫方面铺平了道路。随着鸵鸟的大量引进，我们的检疫工作也日趋繁重，而鸵鸟的检疫在我国还是个崭新的课题，为总结近年来进境鸵鸟的检疫经验，进一步提高检疫水平，防止疫病随进口鸵鸟及其种蛋传入我国，使鸵鸟的检疫工作更加规范化和标准化，保证进境鸵鸟检疫工作的顺利进行，现就进境鸵鸟及其种蛋入境后的检疫工作的有关问题通知如下：
一、进境鸵鸟检疫
1．鸵鸟入境后须在口岸动植物检疫局指定的隔离场所进行为期45天的隔离检疫
，如须延长隔离检疫时间，须报国家局批准。
2．鸵鸟运抵隔离场一周后，逐只进行采血采样，并分成两份，其中一份保存备
查，并注意编号。
3．隔离检疫期间的实验室检疫项目，主要依照我国与输出国缔结的鸵鸟检疫议
定书规定的实验室检疫项目进行。如发生特种情况可做特殊检疫项目。
4．实验室检疫的操作试行程序附后。
二、进境鸵鸟种蛋检疫
1．进境种蛋的孵化厂须获得口岸动植物检疫机关的认可。
2．进境鸵鸟种蛋在入孵前，须用有效的消毒药进行熏蒸处理。
3．进境种蛋不得与其他种蛋一同孵化。
4．首次孵出的小鸟须在口岸动植物检疫机关认可的场所由口岸检疫机关隔离检
疫30天，在此期间采样并依照我国与输出国缔结的鸵鸟种蛋的检疫议定书规定的项目作实验室检疫。
三、其他未尽事宜按《进境动物检疫管理办法》执行。
四、在执行过程中有何问题，请及时上报国家局。
附件：鸵鸟疫病实验室检疫操作试行规程
中华人民共和国动植物检疫局
一九九六年八月二十六日
鸵鸟沙门氏菌泄殖腔拭子培养规程（试行）
一、材料：
灭菌棉拭子、缓冲蛋白胨水、亚硒盐胱氨酸增菌液、胆硫乳琼脂、三糖铁琼脂、生化试验管、多价血清因子、细菌培养必需设备。
二、操作方法：用无菌棉拭子从泄殖腔取样，放无菌瓶中，尽可能冷藏于2～4℃，编号后送实验室检验。
三、实验室检验：
┌────────┐
│ 棉拭子样品 │
└─┬──────┘
│
┌─────┴─────┐
│ 缓冲蛋白胨水 │
└───┬───────┘
３７℃ │１８￣２４hr
┌──┴───────┐
│ 亚硒盐胱胺酸增菌液 │
└─┬────────┘
３７℃│ １８￣２４hr
│
┌───┴───┐
│ ＤＨＬ培养基 ├────────────────┐
└─┬─────┘ │
┌──┴───────┐ ┌──┴────┐
│挑取可疑菌落划线接种│ │ 可疑菌落 │
└────┬─────┘ └──┬────┘
│ │
┌───┴────┐ │
│ 三糖铁培养基 │ │
└──┬─────┘ ┌────┴──────┐
│ │ 革兰氏染色，镜检 │
３７℃ │ １８￣２４hr │ │
│ └────────┬──┘
┌─┴──┐ │
┌─┤细菌鉴定├───┐ │
│ └────┘ │ │
│ │ │
┌┴───┐ ┌─┴──────┐ │
│生化试验│ │ 血清学试验 │ │
└─┬──┘ └┬───────┘ │
│ ┌┴─────┐ │
└───────┤综合判定结果├─────────────┘
└─┬────┘
┌─┴────────┐
│ 试验结果报告 │
└──────────┘
鸵鸟鹦鹉热间接血凝（IHA）操作规程（试行）
一、本规程适用于鸵鸟衣原体病的诊断。
二、材料
衣原体属抗原致敏绵羊红细胞
标准阴、阳性对照血清
被检血清：采集鸵鸟血清，试验前于56℃水浴灭活30分钟。
90度V型反应板
灭菌生理盐水
微量加样器
三、试验方法
1．将生理盐水滴于V型反应板中，每孔50ul。
2．取被检血清50ul于第一孔中，与生理盐水混匀后吸50ul于第二孔，依次作倍
比稀释至1∶16。
3．将1∶8和1∶16两孔各加25ul抗原，如作定量试验可根据实际需要自行决定。
4．对照试验：设阳性血清＋抗原、阴性血清＋抗原、生理盐水＋抗原各一孔。
四、血凝反应程度的标准：
“＋＋＋＋”：红细胞全部凝集，形成一层均匀的膜，布满整个孔底。
“＋＋＋”：红细胞在孔底形成一层薄膜，面积比前者稍小。
“＋＋”：红细胞在孔底形成薄层凝集，边缘松散或呈锯齿状。
“＋”：红细胞在孔底呈稀薄、散在、少量凝集，孔底有小圆点。
“＋”：红细胞沉于孔底，但周围不光滑或中心有空斑。
“—”：红细胞完全沉于孔底，呈光滑的圆点。
“＋＋”以上的凝集判为阳性凝集。
五、结果判定
1．对照试验：出现如下结果试验方可成立，否则应重试，阳性血清＋抗原呈“
＋＋＋＋”；阴性血清十抗原呈“-”；抗原十生理盐水
2．被检样品判定标准：血清效价＞1∶8（＋＋）判为阳性。
鸵鸟新城疫、禽流感、付粘病毒分离操作规程（试行）
本规程适用于新城疫、禽流感、付粘病毒的分离
一、材料
1．消毒棉拭子
2．灭菌试管
3．灭菌生理盐水
4．泄殖腔棉拭子保存液：PBS，PH7．2-7.4，青霉素1万单位／ml，链霉素10mg/m1，庆大霉素250ug/ml，制霉素5000u／ml。
5．SPF种蛋。
6．90度V型反应板。
7．微量加样器。
二、操作方法
1．将采集的泄殖腔棉拭子置于样品保存液中，置4℃过夜。次日3000rpm离心10min，上清液作菌检后接种9～10日龄鸡胚（每胚0．2ml），37℃再孵育5天，去掉24小时死亡的鸡胚，其他鸡胚放4℃冷却后，检测鸡胚尿囊液的血凝滴度。如尿囊液
的血凝反应呈阴性，应再用鸡胚盲传2代。
2．将收集的尿囊液用PBS以25ul量进行倍比稀释，加25ul的1％鸡红细胞，轻轻
混匀，静置15～30min，判定血凝滴度。
如鸡胚尿囊液的血凝试验呈阳性，应分别用新城疫病毒、禽流感病毒、副粘病毒的阳性血清作血凝抑制试验以检测病毒的种类。
表一 鸡胚尿囊液血凝试验 （单位：ul）
┌─────┬────┬────┬────┬────┬────┬────┬────┬────┬────┬────┬───┬────┐
│ 孔号 │ 1 │ 2 │ 3 │ 4 │ 5 │ 6 │ 7 │ 8 │ 9 │ 10 │ 11│ 12 │
├─────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼───┼────┤
│抗原稀释度│ 1∶2 │ 1∶4 │ 1∶8 │1∶16 │1∶32 │ 1∶64 │ 1∶128│ 1∶256│ 1∶512│1∶1024 │对照 │对照 │
├─────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼───┼────┤
│ 生理盐水│ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 50│ 50 │
├─────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼───┼────┤
│ 抗原 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ │ │
├─────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼───┼────┤
│1％红细胞 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25│ 25 │
└─────┴────┴────┴────┴────┴────┴────┴────┴────┴────┴────┴───┴────┘
室温15min，每5mim观察一次
┌─────┬────┬────┬────┬────┬────┬────┬────┬────┬────┬────┬───┬────┐
│ 判定举例│++++ │++++ │++++ │+++ │ ++ │ - │ - │ - │ - │ - │ - │ - │
└─────┴────┴────┴────┴────┴────┴────┴────┴────┴────┴────┴───┴────┘
禽流感血凝抑制试验操作程序（试行）
一、试验材料
1．抗原：禽流感病素H5、H7型抗原；
2．阴、阳性对照血清。
3．红细胞：无菌采集鸡血液5～10ml于少许阿氏液中摇匀，以洗涤3～5次，每次3000rpm离心10min，将血浆、白细胞充分洗去至上清液清亮，再将沉淀的红细胞稀释成1％的红细胞悬浮液（RBC）；
4．被检血清：采集被检鸵鸟血液，离心分离血清，56℃灭活30min；
5．稀释液：灭菌的生理盐水或PBS（pH7．2～7．4）
6．90度V型反应板，微量加样器。
二、试验操作
1．血凝试验（HA）：
取干净的微量滴定板（V型）一块，按表一进行操作：每孔加25ul生理盐水，孔
1加禽流感抗原25ul，用移液器反复吹打混匀三次；吸出25ul于孔2，吹打混匀后吸出25ul于孔3；如此依次稀释到孔10，孔10混匀后吸出25ul弃掉。孔11、12不加抗原
，只加生理盐水作空白对照。加入1％的红细胞悬浮液25ul，充分振荡后置于室温；
每5min观察一次，15～30min后判定结果，并作好记录。
表一 禽流感血凝试验 （单位：ul）
┌─────┬───┬───┬───┬───┬───┬───┬────┬────┬────┬────┬───┬───┐
│ 孔号 │ 1 │ 2 │ 3 │ 4 │ 5 │ 6 │ 7 │ 8 │ 9 │ 10 │ 11│ 12│
├─────┼───┼───┼───┼───┼───┼───┼────┼────┼────┼────┼───┼───┤
│抗原稀释度│ 1∶2│ 1∶4│ 1∶8│1∶16 │1∶32 │1∶64 │ 1∶128│ 1∶256│ 1∶512│1∶1024 │对照 │对照 │
├─────┼───┼───┼───┼───┼───┼───┼────┼────┼────┼────┼───┼───┤
│生理盐水 │ 25│ 25│ 25│ 25│ 25│ 25│ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 50│ 50│
├─────┼───┼───┼───┼───┼───┼───┼────┼────┼────┼────┼───┼───┤
│ 抗原 │ 25│ 25│ 25│ 25│ 25│ 25│ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ │ │
├─────┼───┼───┼───┼───┼───┼───┼────┼────┼────┼────┼───┼───┤
│1％红细胞 │ 25│ 25│ 25│ 25│ 25│ 25│ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25│ 25│
└─────┴───┴───┴───┴───┴───┴───┴────┴────┴────┴────┴───┴───┘
室温15min，每5min观察一次
┌─────┬───┬───┬───┬───┬───┬───┬────┬────┬────┬────┬───┬───┐
│ 判定举例│ + │ + │ + │ + │ + │ + │ + │ - │ - │ - │ - │ - │
└─────┴───┴───┴───┴───┴───┴───┴────┴────┴────┴────┴───┴───┘
抗原的血凝滴度是凡能使1％的鸡红细胞完全凝集的病毒最高稀释倍数；因此，
能使红细胞完全凝集的最高稀释倍数的病毒液25ul称为1个血凝单位（HA）。如该抗
原的血凝单位为1∶128／25ul。
在进行禽流感血凝抑制试验时，病毒的工作浓度应为8HA。因为该试验的抗原的
血凝单位为1∶128／25ul，按其孔号数（孔．7）倒退3孔的稀释倍数（孔4 1∶16）
，作为该病毒的工作浓度：1∶16／25ul。
2．血凝抑制试验（HI）：
取干净的微量滴定板（V型）一块，按表二进行操作：每孔加25ul生理盐水，孔
1加待检血清25ul，用移液器反复吹打混匀三次；吸出25ul于孔2，吹打混匀后吸出25ul于孔3；如此依次稀释到孔8，孔8混匀后吸出25ul弃掉。孔9作为阳性血清对照，孔10作为阴性血清对照，孔11不加任何血清而作为抗原对照，孔12不加抗原和任何血清，只加PBS作空白对照。各孔加入1％的红细胞悬浮液25ul，充分振荡后置于室温；每5min观察一次，15～30min后判定结果，并作好记录。
未免疫的健康鸵鸟血清无血凝抑制作用，各稀释倍数均出现红细胞凝集现象；禽流感感染或免疫的鸵鸟血清能抑制禽流感病毒对红细胞的凝集作用。凡能使8HA的
抗原凝集红细胞作用完全抑制的血清最高稀释倍数，称为该血清的血凝抑制价（如表二的血凝抑制价为1∶64）。
表二 禽流感血凝抑制试验 （单位：ul）
┌──────┬───┬───┬───┬────┬────┬───┬────┬────┬────┬────┬───┬───┐
│ 孔号 │ 1 │ 2 │ 3 │ 4 │ 5 │ 6 │ 7 │ 8 │ 9 │ 10 │ 11│ 12│
├──────┼───┼───┼───┼────┼────┼───┼────┼────┼────┼────┼───┼───┤
│血清稀释度 │ 1∶2│ 1∶4│ 1∶8│ 1∶16 │ 1∶32 │1∶64 │ 1∶128│ 1∶256│ 阳性 │ 阴性 │抗原 │对照 │
├──────┼───┼───┼───┼────┼────┼───┼────┼────┼────┼────┼───┼───┤
│ 生理盐水 │ 25│ 25│ 25│ 25 │ 25 │ 25│ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 50│ 75│
├──────┼───┼───┼───┼────┼────┼───┼────┼────┼────┼────┼───┼───┤
│ 被检血清 │ 25│ 25│ 25│ 25 │ 25 │ 25│ 25 │ 25 │ (25)│ (25)│ │ │
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│ 8HA抗原 │ 25│ 25│ 25│ 25 │ 25 │ 25│ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25│ │
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室温感作5～6min
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│ 1％红细胞 │ 25│ 25│ 25│ 25 │ 25 │ 25│ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 25│ 25│
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室温15min，每5min观察一次
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│ 判定举例 │ - │ - │ - │ - │ - │ + │ + │ + │ + │ + │ + │ + │
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3．判定标准
1）判定时应首先观察各对照孔是否完全符合；
2）红细胞凝集：红细胞分散在孔底四周呈均匀的颗粒状凝集且布满整个孔底，
判为血凝作用为阳性“十”；
3）无凝集或凝集抑制：红细胞集中于孔底中央呈点状，判血凝作用为阴性“—
”，或判血凝抑制作用为阳性；
4）血凝抑制价：凡能使抗原的血凝作用完全受到抑制的最高血清稀释倍数；
5）被检血清的血凝抑制价在1∶8以上者，判为阳性反应；
6）最后判定时间与感作时间有关。温度高时感作时间短，15min即可；温度低时可适当延长，但最长不得超过30min。
禽流感琼脂扩散试验操作规程（试行）
1．琼脂凝胶平板的制备：称取琼脂糖1g，氯化钠8．5g，加入100ml蒸馏水，10磅10分钟高压溶解后，冷却至45℃，加入0．01％叠氮钠，每个直径6CM平皿加7ml融化琼脂，厚度为2．8mm，待凝固后置冰箱内片刻。
2．打孔：中间一孔，周围六孔为一组，孔径3mm，孔居2．5mm。
3．加样：中心孔加抗原，周围1、3、5孔加阳性血清，2、4、6孔加被检血清。
4．加样后置湿盒内，于室温下感作。
5．结果判定：24小时初判，48小时终判，阳性对照成立时，进行判定。
阳性：被检血清孔与抗原孔之间出现致密沉淀线，并与标准阳性血清的沉淀线末端互相联接。
可疑：标准阳性血清孔和抗原孔之间的沉淀线向被检血清孔内侧弯曲。
阴性：抗原孔与被检血清孔之间不出现沉淀线或标准阳性血清与阳性孔间的沉淀线向毗邻的被检血清孔直伸或其外侧偏弯。
禽副粘病毒血凝抑制试验操作程序
一、试验材料
1．抗原：禽副粘病毒病毒Ⅱ型抗原；
2．红细胞：无菌采集鸡血液5～10ml于少许阿氏液中摇匀，以洗涤3～5次，每次3000离心10min，将血浆、白细胞充分洗去至上清液清亮，再将沉淀的红细胞稀释
成1％的红细胞悬浮液（RBC）；
3．被检血清：采集被检鸵鸟血液，离心分离血清，56℃灭活30min；
4．稀释液：灭菌的生理盐水或PBS（pH7．2～7．4）
5．阴、阳性对照血清
6．90度V型反应板，微量加样器。
二、试验操作
1．血凝试验（HA）：
取干净的微量滴定板（V型）一块，按表一进行操作：每孔加25ul生理盐水，孔
1加禽流感抗原25ul，用移液器反复吹打混匀三次；吸出25ul于孔2，吹打混匀后吸出25ul于孔3；如此依次稀释到孔10，孔10混匀后吸出25ul弃掉。孔11、12不加抗原
，只加生理盐水作空白对照。加入1％的红细胞悬浮液25ul，充分振荡后置于室温；
每5min观察一次，15～30min后判定结果，并作好记录。
表一 禽副粘病毒血凝试验 （单位：ul）
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│ 孔号 │ 1 │ 2 │ 3 │ 4 │ 5 │ 6 │ 7 │ 8 │ 9 │ 10 │ 11│ 12│
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│抗原稀释度 │ 1∶2│ 1∶4│ 1∶8│1∶16 │1∶32 │1∶64 │ 1∶128│ 1∶256│ 1∶512│ 1∶1024 │对照 │对照 │
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│ 生理盐水 │ 25│ 25│ 25│ 25│ 25│ 25│ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ 50│ 50│
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│ 抗原 │ 25│ 25│ 25│ 25│ 25│ 25│ 25 │ 25 │ 25 │ 25 │ │ │
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